【摘 要】常用的滅菌方法有多種，如濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過濾除菌法。
可根據被滅菌物品的特性采用―種或多種方法組合滅菌。
滅菌后還要采取適當方法進行滅菌廣東深圳專業醫用設備產品外觀工業產品設計現代儀器與醫療2016年第22卷總目次效果驗證，這樣才能保證產品無菌。

　　【關鍵詞】滅菌方法;濕熱;干熱;輻射;滅菌效果;驗證
　　
　　一、滅菌方法
　　滅菌法系指用適當的物理或化學手段將物品中活的微生物殺滅或除去，從而使物品殘存活微生物的概率下降至預期的無菌保證水平的方法。

　　無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。
對于任何一批滅菌物品而言，絕對無菌既無法保證也無法用試驗來證實。
一批物品的無菌特性只能相對地通過物品中活微生物的概率低至某個可接受的水平來表述，即無菌保證水平(Sterility assurance level，簡稱SAL)。
實際生產過程中，滅菌是指將物品中污染微生物的概率下降至預期的無菌保證水平。
最終滅菌的物品微生物存活概率，即無菌保證水平不得高于10-6。
已滅菌物品達到的無菌保證水平可通過驗證確定。

　　常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過濾除菌法。
可根據被滅菌物品的特性采用―種或多種方法組合滅菌。
只要物品允許，應盡可能選用最終滅菌法滅菌。
若物品不適合采用最終滅菌法，可選用過濾除菌法或無菌生產工藝達到無菌保證要求，只要可能，應對非最終滅菌的物品作補充性滅菌處理(如流通蒸汽滅菌)。

　　1．濕熱滅菌法
　　本法系指將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質、核酸發生變性而殺滅微生物的方法。
該法滅菌能力強，為熱力滅菌中最有效、應用最廣泛的滅菌方法。
藥品、容器、培養基、膠塞以及其他遇高溫和潮濕不發生變化或損壞的物品，均可采用本法滅菌。

　　采用濕熱滅菌，被滅菌物品應有適當的裝載方式，不能排列過密，以保證滅菌的有效性和均一性。

　　濕熱滅菌法應確認滅菌柜在不同裝載時可能存在的冷點。
當用生物指示劑進一步確認滅菌效果時，應將其置于冷點處。
本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。

　　2．氣體滅菌法
　　本法系指用化學消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。
常用的化學消毒劑為環氧乙烷、氣態過氧化氫、甲醛、臭氧(O3)等，本法適用于在氣體中穩定的物品滅菌。
采用氣體滅菌法時，應注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。

　　本法中最常用的氣體是環氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內進行。
該法可用于醫療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。
含氯的物品及能吸附環氧乙烷的物品則不宜使用。

　　使用生物指示劑監控滅菌效果，對滅菌物品中的環氧乙烷殘留物和反應產物進行監控，以證明其不超過規定的濃度，避免產生毒性。

　　采用環氧乙烷滅菌時，應進行泄漏試驗，以確認滅菌腔室的密閉性。
滅菌程序確認時，還應考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對滅菌氣體的擴散和滲透的影響。
生物指示劑一般采用枯草芽孢桿菌孢子（Spores of Bacillussubtilis）。

　　3．輻射滅菌法
　　本法系指將滅菌物品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發生的電子束中進行電離輻射而達到殺滅微生物的方法。
本法最常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。
醫療器械、容器、生產輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。

　　采用輻射滅菌法滅菌的無菌物品其SAL 應≤10-6。
γ射線輻射滅菌所控制的參數主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)。
該劑量的制定應考慮滅菌物品的適應性及可能污染的微生物最大數量及最強抗輻射力，所使用的劑量事先應驗證不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩定性。
常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。
對最終產品、原料藥、某些醫療器材應盡可能采用低輻射劑量滅菌。

　　60Co-γ射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子（Spores of Bacillus pumilus）。

　　二、滅菌效果的驗證（以管路產品為例）
　　1、濕熱滅菌法和輻射滅菌法
　　檢測環境的要求：
　　潔凈度10000級以下局部100級的超凈工作臺單向流空氣環境下，并且環境潔凈度檢驗合格。

　　1.2.1.培養基的適用性檢查
　　1.2.1.1無菌性檢查 取滅菌后的兩種培養基各5支，按規定溫度培養14天，均應無菌生長。

　　1.2.1.2靈敏度檢查
　　所需菌種：
　　金黃色葡萄球菌[CM22(B)26 003]
　　枯草芽孢桿菌[廣東深圳專業醫用儀器器材外觀工業產品設計“不止是遠程醫療，更是網絡醫療服務”CM22(B)63 501]
　　生孢梭菌[CM22(B) 64 941]
　　白色念珠菌[CM22(B)）98001]
　　黑曲霉[CM22(B)98 003]
　　培養基接種：
　　取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養基9支，分別接種確定好稀釋級的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照，培養3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養基5支，分別接種確定好稀釋級的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養5天，逐日觀察結果。

　　結果判斷：
　　空白對照管應無菌生長，若加菌的培養基管均生長良好，判該培養基的靈敏度檢查符合規定。

　　1.2.2檢驗方法驗證（薄膜過濾法）
　　取產品用10ml注射器按102m2：1ml吸取提取液，以10ml/min速度沖洗產品內壁，收集沖洗液（內外壁）于無菌三角瓶中，將沖洗液分成三份，分別將其倒于三張濾膜上，過濾，再用沖洗液沖洗濾膜，反復三次，取出濾膜，分別置于含20ml硫乙醇酸鹽流體培養基及改良馬丁培養基的試管中；用沖洗液沖洗濾膜，反復三次，在最后一次沖洗液中加入確定好稀釋級的試驗菌，過濾，取出濾膜接種至相應的培養基中；另取一裝有同體積培養基的試管，加入等量的試驗菌，作為陽性對照。
按規定溫度培養3―5天。

　　各試驗菌同法操作。

　　結果判斷：
　　與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則供試品的該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，照此檢查法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。
如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，則供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，可采用增加沖洗量，或增加培養基的用量，更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進行方法驗證。

　　1.2.3產品檢查
　　取產品用10ml注射器按102m2：1ml吸取提取液，以10ml/min速度沖洗產品內壁，收集沖洗液（內外壁）于無菌三角瓶中，將沖洗液分成三份，分別將其倒于三張濾膜上，過濾，再用沖洗液沖洗濾膜，反復三次，取出濾膜，分別置于含20ml硫乙醇酸鹽流體培養基及改良馬丁培養基的試管中，其中一份做陽性對照用。

　　陽性對照：方法同上，在最后一次沖洗液中加入確定好稀釋級的金黃色葡萄球菌，培養48―72小時應生長良好。

　　陰性對照：方法同上，只是直接將沖洗液或提取液倒于濾膜上，其上不得有菌生長。

　　上述含培養基的容器按規定的溫度培養14天。
培養期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。
如在加入供試品后、或在培養過程中，培養基出現渾濁，培養14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養基液適量轉種至同種新鮮培養基中或劃線接種于斜面培養基上，細菌培養2天、真菌培養3天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現渾濁或斜面是否有菌生長；或取培養液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

　　結果判斷：
　　若供試品均澄清，或廣東深圳專業醫用器械開發公司工業產品設計壓縮研發時間雖顯渾濁但經確證無菌生長，則滅菌完全；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，則滅菌不完全，除非能充分證明試驗結果無效。

　　2、氣體滅菌法
　　將產品最難滅菌部位放置一定數量的菌片，用所需檢測的包裝袋按正常程序包裝，熱合。
之后用相應培養基培養菌片7天后觀察是否滅廣東深圳專業醫療設備外觀工業產品設計香港＋深圳，完美姻緣？菌完全。

　　對照菌片：枯草芽孢桿菌孢子
　　將菌片取出，按滅菌鍋布點位置，順序培養在無菌營養肉湯中，置30--35℃恒溫箱中培養觀察7天廣東深圳專業醫療產品器材外觀工業產品設計產品。
每天記錄是否有菌生長。

　　若培養基澄清，或雖顯渾濁但經確證無菌生長，則滅菌完全；若任何一管顯渾濁并確證有菌生長，則滅菌不完全，除非能廣東深圳專業飛依諾超聲產品設計公司重復使用的醫療器械集中清洗消毒實施對策充分證明試驗結果無效。

　　三、結論
廣東深圳專業醫療器械開發工業產品設計醫療器械設備維修和管理探析　　按照正常合理的滅菌程序滅菌，滅菌后采用正確又適當的方法進行驗證，才能保證產品無菌。

　　參考文獻
　　[1]中華人民共和國藥典2010版
　　[2]微生物學使用手冊
　　[3]EN868-1醫用物品滅菌的包裝材料和系統第一部分：通用要求和測試方法
　　[4]EN554 醫療用品的滅菌 ? 濕熱滅菌的驗證和常規控制